বেশিরভাগ ভাইরাসের জিনোমিক সিকোয়েন্স জানা গেছে।নিউক্লিক অ্যাসিড প্রোবগুলি যা ডিএনএর ছোট অংশ যা পরিপূরক ভাইরাল ডিএনএ বা আরএনএ অংশগুলির সাথে হাইব্রিডাইজ করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) ভাইরাল সনাক্তকরণের জন্য একটি আরও দক্ষ কৌশল।উচ্চ থ্রুপুট ডায়াগনস্টিক পদ্ধতি সম্প্রতি উন্নত করা হয়েছে।
উ: নিউক্লিক অ্যাসিড সংকরায়ন কৌশল
নিউক্লিক অ্যাসিড হাইব্রিডাইজেশন, প্রধানত সাউদার্ন ব্লটিং (সাউদার্ন) এবং নর্দার্ন ব্লটিং (উত্তর) সহ, ভাইরাস ডায়াগনস্টিক ক্ষেত্রে একটি দ্রুত বিকাশমান নতুন কৌশল।হাইব্রিডাইজেশন অ্যাসের যৌক্তিক ডিএনএ (যাকে "প্রোব" বলা হয়) পরিপূরক ভাইরাল ডিএনএ বা আরএনএ অংশগুলির সাথে হাইব্রিডাইজ করার জন্য ডিজাইন করা ছোট অংশগুলি ব্যবহার করা।গরম বা ক্ষারীয় চিকিত্সার মাধ্যমে, ডবল-স্ট্র্যান্ডেড টার্গেট ডিএনএ বা আরএনএ একক স্ট্র্যান্ডে বিভক্ত হয় এবং তারপর একটি শক্ত সমর্থনে স্থির হয়।এর পরে, প্রোব যোগ করা হয় এবং লক্ষ্য ডিএনএ বা আরএনএর সাথে হাইব্রিডাইজ করা হয়।যেহেতু প্রোবটি আইসোটোপ বা অ-তেজস্ক্রিয় নিউক্লাইড দিয়ে লেবেলযুক্ত, তাই লক্ষ্য ডিএনএ বা আরএনএ অটোরেডিওগ্রাফির মাধ্যমে বা বায়োটিন-অভিডিন সিস্টেমের মাধ্যমে সনাক্ত করা যেতে পারে।যেহেতু বেশিরভাগ ভাইরাল জিনোম ক্লোন এবং সিকোয়েন্স করা হয়েছে, তাই নমুনাতে প্রোব হিসাবে ভাইরাস-নির্দিষ্ট ক্রম ব্যবহার করে সেগুলি সনাক্ত করা যেতে পারে।বর্তমানে, হাইব্রিডাইজেশন পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে: ডট ব্লট, ইন সিটু হাইব্রিডাইজেশন কোষে, ডিএনএ ব্লটিং (ডিএনএ) (সাউদার্ন ব্লট) এবং আরএনএ ব্লটিং (আরএনএ) (উত্তর দাগ)।
B.PCR প্রযুক্তি
সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, সংবেদনশীল বা অচাষযোগ্য ভাইরাসগুলি পরীক্ষা করার জন্য পিসিআর-এর উপর ভিত্তি করে ভিট্রো নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধন কৌশলগুলির একটি সিরিজ তৈরি করা হয়েছে।পিসিআর এমন একটি পদ্ধতি যা ইন ভিট্রো পলিমারেজ প্রতিক্রিয়া দ্বারা নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সংশ্লেষণ করতে পারে।পিসিআর প্রক্রিয়ায় তিনটি ধাপের একটি তাপচক্র রয়েছে: বিকৃতকরণ, অ্যানিলিং এবং এক্সটেনশন উচ্চ তাপমাত্রায় (93℃~95℃), ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ দুটি একক ডিএনএ স্ট্র্যান্ডে বিভক্ত হয়;তারপরে নিম্ন তাপমাত্রায় (37℃~60℃), দুটি সংশ্লেষিত নিউক্লিওটাইড প্রাইমার পরিপূরক ডিএনএ অংশে অ্যানিল করে;যেখানে Taq এনজাইমের জন্য উপযুক্ত তাপমাত্রায় (72℃), নতুন ডিএনএ চেইনগুলির সংশ্লেষণ প্রাইমার 3'এন্ড থেকে শুরু হয় টেমপ্লেট হিসাবে পরিপূরক ডিএনএ এবং উপাদান হিসাবে একক নিউক্লিওটাইড ব্যবহার করে।সুতরাং প্রতিটি চক্রের পরে, একটি ডিএনএ চেইন দুটি শৃঙ্খলে বিবর্ধিত হতে পারে।এই প্রক্রিয়াটি পুনরাবৃত্তি করে, একটি চক্রে সংশ্লেষিত প্রতিটি ডিএনএ চেইন পরবর্তী চক্রে টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে, এবং প্রতিটি চক্রে ডিএনএ চেইনের সংখ্যা দ্বিগুণ হয়, যার অর্থ পিসিআর-এর উত্পাদন 2n লগ গতিতে প্রসারিত হয়।25 থেকে 30 চক্রের পরে, ইলেক্ট্রোফোরসিসের মাধ্যমে পিসিআরের উত্পাদন সনাক্ত করা হয় এবং নির্দিষ্ট ডিএনএ পণ্যগুলি UV আলো (254nm) এর অধীনে পর্যবেক্ষণ করা যেতে পারে।নির্দিষ্টতা, সংবেদনশীলতা এবং সুবিধার জন্য, পিসিআর অনেক ভাইরাল সংক্রমণ যেমন এইচসিভি, এইচআইভি, সিএমভি এবং এইচপিভির ক্লিনিকাল নির্ণয়ের ক্ষেত্রে গৃহীত হয়েছে।যেহেতু পিসিআর অত্যন্ত সংবেদনশীল, এটি fg স্তরে ভাইরাস ডিএনএ সনাক্ত করতে পারে, তাই মিথ্যা পজিটিভ এড়াতে অপারেশনটি খুব সাবধানে করা উচিত।এছাড়াও, নিউক্লিক অ্যাসিড পরীক্ষায় ইতিবাচক ফলাফলের অর্থ এই নয় যে নমুনায় জীবন্ত সংক্রামক ভাইরাস রয়েছে।
পিসিআর কৌশলের ব্যাপক প্রয়োগের সাথে, বিভিন্ন পরীক্ষার উদ্দেশ্যে পিসিআর কৌশলের উপর ভিত্তি করে নতুন কৌশল এবং পদ্ধতি তৈরি করা হয়।উদাহরণস্বরূপ, রিয়েল টাইম পরিমাণগত পিসিআর ভাইরাল লোড সনাক্ত করতে পারে;ইন সিটু পিসিআর টিস্যু বা কোষে ভাইরাস সংক্রমণ সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়;নেস্টেড পিসিআর পিসিআর-এর নির্দিষ্টতা বাড়াতে পারে।তাদের মধ্যে, বাস্তব সময়ের পরিমাণগত পিসিআর আরও দ্রুত বিকশিত হয়েছে।অনেক নতুন কৌশল, যেমন TaqMan হাইড্রোলাইসিস প্রোব, হাইব্রিডাইজেশন প্রোব এবং মলিকুলার বীকন প্রোবকে রিয়েল টাইম কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর টেকনিকের সাথে একত্রিত করা হয়েছে, যা ক্লিনিকাল গবেষণায় ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।রোগীদের শরীরের তরলে ভাইরাল লোড নির্ভুলভাবে সনাক্ত করার পাশাপাশি, এই পদ্ধতিটি ড্রাগ-সহনশীল মিউট্যান্ট সনাক্ত করতেও ব্যবহার করা যেতে পারে।অতএব, রিয়েল টাইম পরিমাণগত পিসিআর প্রধানত নিরাময় প্রভাব মূল্যায়ন এবং ড্রাগ সহনশীলতা নজরদারিতে প্রয়োগ করা হয়।
C. ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিডের উচ্চ-থ্রুপুট সনাক্তকরণ
নতুন উদ্ভূত সংক্রামক রোগের দ্রুত নির্ণয়ের প্রয়োজনীয়তা মেটাতে, ডিএনএ চিপস (ডিএনএ) এর মতো বিভিন্ন উচ্চ-থ্রুপুট সনাক্তকরণ পদ্ধতি প্রতিষ্ঠিত হয়েছে।ডিএনএ চিপগুলির জন্য, নির্দিষ্ট প্রোবগুলিকে সংশ্লেষিত করা হয় এবং খুব উচ্চ ঘনত্বে ছোট সিলিকন চিপগুলির সাথে সংযুক্ত করা হয় যাতে ডিএনএ প্রোব মাইক্রোয়ারে (ডিএনএ) তৈরি করা হয় যা নমুনার সাথে হাইব্রিডাইজ করা যায়।হাইব্রিডাইজেশনের সংকেত কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ বা লেজার স্ক্যানার দ্বারা চিত্রিত করা যেতে পারে এবং কম্পিউটার দ্বারা আরও প্রক্রিয়া করা যেতে পারে এবং বিভিন্ন জিন সম্পর্কিত বিশাল ডেটা সেট প্রাপ্ত করা যেতে পারে।দুই ধরনের ডিএনএ চিপ আছে।"সংশ্লেষণ চিপ" নিম্নরূপ: নির্দিষ্ট অলিগোনিউক্লিওটাইডগুলি সরাসরি চিপগুলিতে সংশ্লেষিত হয়।আরেকটি হল ডিএনএ পুল চিপ।ক্লোন করা জিন বা পিসিআর পণ্যগুলি স্লাইডে সুশৃঙ্খলভাবে মুদ্রিত হয়।ডিএনএ চিপ প্রযুক্তির সুবিধা হল বিপুল পরিমাণ ডিএনএ সিকোয়েন্সের একযোগে সনাক্তকরণ।প্যাথোজেন সনাক্তকরণ চিপের সর্বশেষ সংস্করণটি একসাথে 1700 টিরও বেশি মানব ভাইরাস সনাক্ত করতে পারে।ডিএনএ চিপ প্রযুক্তি ঐতিহ্যগত নিউক্লিক অ্যাসিড হাইব্রিডাইজেশন পদ্ধতির সমস্যার সমাধান করেছে এবং ভাইরাল রোগ নির্ণয় এবং মহামারী সংক্রান্ত গবেষণায় এর ব্যাপক প্রয়োগ রয়েছে।
পোস্টের সময়: ডিসেম্বর-২৩-২০২০